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天然防腐剂的研究方法——比浊法

返回列表 浏览量: 发布日期:2019-05-20 11:22

由于细菌悬液的浓度与光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测的OD值与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线,此法快捷、简便。生长曲线反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线,可了解各菌的生长规律,对于科研和生产都具有重要的指导意义。
比浊法的操作步骤如下:
(1)种子液制备取大肠杆菌斜面菌种1支,以无菌操作挑取1环菌苔,接人肉膏蛋白胨培养液中,静止培养18h作种子培养液。
(2)标记编号取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个,分别编号为0,1.5,3,4,6,8,10,12,14,16,20hom。
(3)接种培养用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中,于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出,立即放冰箱中贮存,待培养结束时一同测定OD值。
(4)生长量测定将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中,选用600m波长分光光度计上调节零点,作为空白对照,并对不同时间培养液从0h起。依次进行测定,对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定,使其OD值为0.10~0.65,经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数,オ是培养液实际的OD值。
(5)结果将测定的OD值填入表中,以时间为横坐标,ODom值为纵坐标,绘制大肠杆菌的生长曲线。目前市场上已经有微生物比浊法测定仪销售,这样就可以大大减少实验工作量,提高实验的准确性。 



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